Bilindiği üzere Tom ve Jerry yıllardır düşmanlıkları süren ezeli rakiplerdir. Peki her hikâyede böyle olmak zorunda mı? Tabii ki hayır. Tom and Jerry: Cowboy Up! filminde bu sefer Vahşi Batı’da yaşayan ve aynı zamanda bir kovboy olan kıza ve onun erkek kardeşine yardım etmek için güçlerini birleştirirler. Peki yıllar süren itiş kakıştan sonra bu birliktelik işlerine yarayacak mı? Hikâyenin başlangıç noktası ise Tom ve Jerry’nin, Vahşi Batı’da yer alan bir çiftlik evine gelmeleriyle başlar. İki haydut bir kıza ve onun kardeşine günlerini zehir ediyordur. Haydutlar kızın sahip olduğu topraklara göz dikmişlerdir. Tom ve Jerry’de buna dayanamayıp iki kardeşe yardım etmeye karar verirler ve haydutlara karşı dururlar. İki kardeş sonunda gün yüzü görecekler mi?